ਉਤਪਾਦ

ਕੋਲੀਸਿਨ E1 ਚੈਨਲ ਡੋਮੇਨ ਦੀ ਝਿੱਲੀ ਦੇ ਟੋਪੋਲੋਜੀ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਰੈਜ਼ੋਨੈਂਸ ਐਨਰਜੀ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ (FRET) ਦੁਆਰਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।FRET ਵਿੱਚ ਦਾਨੀ ਦੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਜੈਨੇਟਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਏਨਕੋਡ ਕੀਤੇ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡ (ਕੁਮਾਰਿਨ) ਅਤੇ FRET ਸਵੀਕਰ ਵਜੋਂ DABMI (4-(ਡਾਈਮੇਥਾਈਲਾਮਿਨੋ) ਫੀਨੀਲਾਜ਼ੋਫੇਨਾਇਲ-4'-ਮੈਲੀਮਾਈਡ) ਦੇ ਨਾਲ ਟੇਥਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਇੱਕ ਚੋਣਵੇਂ ਲੇਬਲ ਵਾਲੇ ਸਿਸਟੀਨ ਦੀ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ।ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਕੁਮਰੀਨ ਦੀ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਨੂੰ ਇੱਕ ਔਰਥੋਗੋਨਲ tRNA/aminoacyl-tRNA ਸਿੰਥੇਟੇਸ ਜੋੜਾ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜੋ ਕੋਲੀਸਿਨ ਚੈਨਲ ਡੋਮੇਨ ਦੇ ਅੰਦਰ ਕਿਸੇ ਵੀ ਸਾਈਟ ਵਿੱਚ ਚੋਣਵੇਂ ਸ਼ਮੂਲੀਅਤ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ।ਹਰੇਕ ਵੇਰੀਐਂਟ ਵਿੱਚ ਕੁਮਰਿਨ ਇਨਕਾਰਪੋਰੇਸ਼ਨ ਲਈ ਇੱਕ ਸਟਾਪ (TAG) ਪਰਿਵਰਤਨ ਅਤੇ DABMI ਅਟੈਚਮੈਂਟ ਲਈ ਇੱਕ ਸਿਸਟੀਨ (TGT) ਪਰਿਵਰਤਨ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ।ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਅਤੇ ਝਿੱਲੀ-ਬੱਧ ਅਵਸਥਾਵਾਂ ਦੋਵਾਂ ਲਈ FRET ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਹੈਲੀਸ 1-6 ਦੇ ਅੰਦਰ ਛੇ ਅੰਤਰ-ਹਿਲੀਕਲ ਦੂਰੀਆਂ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਸਨ।FRET ਡੇਟਾ ਨੇ ਚੈਨਲ ਡੋਮੇਨ ਦੀ ਝਿੱਲੀ-ਬਾਊਂਡ ਬਣਤਰ ਵਿੱਚ ਨਵੀਂ ਸਮਝ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਝਿੱਲੀ ਦੇ ਸਬੰਧ ਵਿੱਚ ਹੈਲੀਸ 3-6 ਵਿਚਕਾਰ ਅੰਤਰ-ਹਿਲੀਕਲ ਦੂਰੀਆਂ ਵਿੱਚ ਵੱਡੇ ਬਦਲਾਅ ਦਿਖਾਏ।ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, coumarin-DABMI FRET ਇੰਟਰਹੇਲੀਕਲ ਕੁਸ਼ਲਤਾਵਾਂ ਕੋਲੀਸਿਨ ਚੈਨਲ ਲਈ ਛੱਤਰੀ ਮਾਡਲ 'ਤੇ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹੋਏ, ਝਿੱਲੀ ਬਾਈਡਿੰਗ 'ਤੇ ਘਟੀਆਂ।ਚੈਨਲ ਡੋਮੇਨ ਦੀ ਬੰਦ ਸਥਿਤੀ ਲਈ ਇੱਕ ਅਸਥਾਈ ਮਾਡਲ ਮੌਜੂਦਾ ਅਤੇ ਪਹਿਲਾਂ ਪ੍ਰਕਾਸ਼ਿਤ FRET ਡੇਟਾ ਦੇ ਅਧਾਰ ਤੇ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਮਾਡਲ 8 ਅਤੇ 9 ਦੁਆਰਾ ਬਣਾਏ ਕੇਂਦਰੀ ਟ੍ਰਾਂਸਮੇਮਬਰੇਨ ਹੇਅਰਪਿਨ ਦੇ ਦੁਆਲੇ ਹੈਲੀਸ 1, 6, 7, ਅਤੇ 10 ਦੇ ਬਾਹਰਲੇ ਪਾਸੇ ਤੋਂ ਇੱਕ ਘੜੀ ਦੀ ਦਿਸ਼ਾ ਵਿੱਚ ਹੈਲੀਸ 1-7 ਦੇ ਗੋਲਾਕਾਰ ਪ੍ਰਬੰਧ ਦਾ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਝਿੱਲੀ 1, 6, 7, ਅਤੇ 10 ਦੇ ਇੰਟਰਫੇਸ਼ੀਅਲ ਐਸੋਸੀਏਸ਼ਨ।