ਉਤਪਾਦ

ਟ੍ਰਿਸ ਐਸੀਟੇਟ ਲੂਣ ਨੂੰ ਅਕਸਰ TAE (Tris-acetate-EDTA) ਬਫਰ ਦੀ ਤਿਆਰੀ ਵਿੱਚ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਇੱਕ ਚੱਲ ਰਹੇ ਬਫਰ ਦੇ ਤੌਰ ਤੇ ਅਤੇ ਐਗਰੋਜ਼ ਜੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਟ੍ਰਿਸ ਐਸੀਟੇਟ-ਈਡੀਟੀਏ ਬਫਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਡੀਐਨਏ ਐਗਰੋਸ ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਪਰ ਗੈਰ-ਡਿਨੇਚਰਿੰਗ ਆਰਐਨਏ ਐਗਰੋਸ ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਲਈ ਵੀ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਡਬਲ-ਸਟੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ TAE ਵਿੱਚ ਦੂਜੇ ਬਫਰਾਂ ਨਾਲੋਂ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਚੱਲਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਵਿਸਤ੍ਰਿਤ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਥੱਕ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਵਿਸਤ੍ਰਿਤ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਬਫਰ ਸਰਕੂਲੇਸ਼ਨ ਜਾਂ ਬਫਰ ਬਦਲਣ ਨਾਲ ਘੱਟ ਬਫਰਿੰਗ ਸਮਰੱਥਾ ਨੂੰ ਠੀਕ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਗਤੀਸ਼ੀਲਤਾ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਕਰਨ ਲਈ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਕਿਉਂਕਿ TBE ਬਫਰ (Tris-Borate-EDTA Buffer, 10X ਪਾਊਡਰ ਪੈਕ, sc-296651) ਵਿੱਚ ਬੋਰੇਟ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮਾਂ ਲਈ ਇੱਕ ਮਜ਼ਬੂਤ ​​​​ਇਨ੍ਹੀਬੀਟਰ ਹੈ, ਡੀਐਨਏ ਨਮੂਨੇ ਲਈ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ ਨੂੰ ਦੇਖਦੇ ਸਮੇਂ TAE ਬਫਰ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਟ੍ਰਿਸ ਐਸੀਟੇਟ ਸਾਲਟ ਫਾਇਰਫਲਾਈ ਲੂਸੀਫੇਰੇਸ ਦੇ ਨਾਲ ਏਟੀਪੀ ਅਸੈਸ ਵਿੱਚ ਉੱਚ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਵਾਲਾ ਇੱਕ ਬਫਰ ਵੀ ਹੈ।

ਉਪਯੋਗ: TAE ਰਨਿੰਗ ਬਫਰ ਡੀਐਨਏ ਐਗਰੋਜ਼ ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਲਈ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਵਰਤਿਆ ਜਾਣ ਵਾਲਾ ਬਫਰ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਹ ਮੂਲ ਆਰਐਨਏ ਐਗਰੋਜ਼ ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਲਈ ਵੀ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ TAE ਵਿੱਚ ਦੂਜੇ ਬਫਰਾਂ ਨਾਲੋਂ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਅੱਗੇ ਵਧਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਤੱਕ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰਸਿਸ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਬਫਰ ਆਇਨਾਂ ਦੀ ਕਮੀ ਦੇ ਕਾਰਨ ਤੈਰਨ ਵਿੱਚ ਵੀ ਅਸਫਲ ਰਹਿੰਦਾ ਹੈ।ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਤੱਕ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰਸਿਸ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਬਫਰ ਸਾਈਕਲਿੰਗ ਜਾਂ ਬਫਰ ਐਕਸਚੇਂਜ ਘੱਟ ਬਫਰ ਸਮਰੱਥਾ ਲਈ ਮੁਆਵਜ਼ਾ ਦੇ ਸਕਦਾ ਹੈ।2 40 mM ਟ੍ਰਿਸ ਐਸੀਟੇਟ ਅਤੇ 1 mM EDTA, pH 8.3 ਵਾਲਾ 1 mMTAE ਬਫਰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਕੇਂਦਰਿਤ TAE ਬਫਰ ਨੂੰ ਪਤਲਾ ਕਰੋ।1 mMTAE ਬਫਰ ਨੂੰ ਐਗਰੋਜ਼ ਜੈੱਲਾਂ ਅਤੇ ਚੱਲ ਰਹੇ ਬਫਰ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਦੋਵਾਂ ਵਿੱਚ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਰੈਜ਼ੋਲਿਊਸ਼ਨ ਲਈ, ਇਹ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਕਿ ਲਾਗੂ ਕੀਤੀ ਵੋਲਟੇਜ 5V/cm (ਯੂਨਿਟ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਡਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਦੂਰੀ) ਤੋਂ ਘੱਟ ਹੋਵੇ।

ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ: TAE ਰਨਿੰਗ ਬਫਰ ਕੈਮੀਕਲਬੁੱਕ ਜੈੱਲ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਐਗਰੋਜ਼ ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਲਈ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਵਰਤਿਆ ਜਾਣ ਵਾਲਾ ਬਫਰ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਹ ਗੈਰ-ਡਿਨੈਚਰਿੰਗ ਆਰਐਨਏ ਐਗਰੋਸ ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਲਈ ਵੀ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ TAE ਵਿੱਚ ਦੂਜੇ ਬਫਰਾਂ ਨਾਲੋਂ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਅੱਗੇ ਵਧਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਤੱਕ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰਸਿਸ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਬਫਰ ਆਇਨਾਂ ਦੀ ਕਮੀ ਦੇ ਕਾਰਨ ਤੈਰਨ ਵਿੱਚ ਵੀ ਅਸਫਲ ਰਹਿੰਦਾ ਹੈ।ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਤੱਕ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰਸਿਸ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਬਫਰ ਸਾਈਕਲਿੰਗ ਜਾਂ ਬਫਰ ਐਕਸਚੇਂਜ ਘੱਟ ਬਫਰ ਸਮਰੱਥਾ ਲਈ ਮੁਆਵਜ਼ਾ ਦੇ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਕੇਂਦਰਿਤ TAE ਬਫਰ ਨੂੰ 1 mMTAE ਬਫਰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਪਤਲਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਸ ਵਿੱਚ 40 mM ਟ੍ਰਿਸ ਐਸੀਟੇਟ ਅਤੇ 1 mM EDTA, pH 8.3 ਸੀ।1 mMTAE ਬਫਰ ਨੂੰ ਐਗਰੋਜ਼ ਜੈੱਲਾਂ ਅਤੇ ਚੱਲ ਰਹੇ ਬਫਰ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਦੋਵਾਂ ਵਿੱਚ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਰੈਜ਼ੋਲਿਊਸ਼ਨ ਲਈ, ਇਹ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਕਿ ਲਾਗੂ ਕੀਤੀ ਵੋਲਟੇਜ 5V/cm (ਯੂਨਿਟ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਡਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਦੂਰੀ) ਤੋਂ ਘੱਟ ਹੋਵੇ।

ਉਪਯੋਗ: ਫਾਇਰਫਲਾਈ ਲੂਸੀਫੇਰੇਸ ਨਾਲ ਏਟੀਪੀ ਦੀ ਖੋਜ ਵਿੱਚ, ਇਹ ਉਤਪਾਦ ਸਭ ਤੋਂ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਬਫਰ ਹੈ;ਗਲੂਟਾਮੇਟ ਬਾਈਡਿੰਗ ਖੋਜ.

ਗੈਰ-ਰਿਸੈਪਟਰ ਸਮੱਗਰੀ ਲਈ [3H]l-ਗਲੂਟਾਮਿਕ ਐਸਿਡ ਦੀ ਵਿਸਥਾਪਨਯੋਗ ਬਾਈਡਿੰਗ।

[3H] L-ਗਲੂਟਾਮਿਕ ਐਸਿਡ ਨੂੰ ਮਾਈਕ੍ਰੋਫਿਊਜ ਟਿਊਬਾਂ ਅਤੇ ਸ਼ੀਸ਼ੇ ਨਾਲ ਜੋੜਨ ਦੀ ਚਾਰ ਬਫਰਾਂ ਵਿੱਚ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਇਹਨਾਂ ਸਮੱਗਰੀਆਂ ਲਈ ਬੈਕਗ੍ਰਾਉਂਡ ਬਾਈਡਿੰਗ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਸੀ, ਪਰ ਟ੍ਰਿਸ-ਐਚਸੀਐਲ ਅਤੇ ਟ੍ਰਿਸ-ਸੀਟਰੇਟ ਬਫਰ ਵਿੱਚ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਜਾਂ ਚੂਸਣ ਦੁਆਰਾ ਵਧਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਇਹ ਬਾਈਡਿੰਗ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਸੀ ਜਾਂ ਜਦੋਂ HEPES-KOH, ਜਾਂ ਟ੍ਰਿਸ-ਐਸੀਟੇਟ ਬਫਰ ਦੀ ਬਜਾਏ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।[3H] ਐਲ-ਗਲੂਟਾਮੇਟ ਮਾਈਕ੍ਰੋਫਿਊਜ ਟਿਊਬਾਂ ਨਾਲ ਬਾਈਡਿੰਗ ਨੂੰ ਐਲ- ਦੁਆਰਾ ਰੋਕਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਪਰ ਗਲੂਟਾਮੇਟ ਅਤੇ ਐਸਪਾਰਟੇਟ ਦੇ ਡੀ-ਆਈਸੋਮਰ ਨਹੀਂ ਸਨ।DL-2-amino-7-phosphonoheptanoic acid ਵੀ ਬਾਈਡਿੰਗ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਨਹੀਂ ਸੀ।ਹੋਰ ਮਿਸ਼ਰਣ ਜੋ ਘੱਟ ਤੋਂ ਦਰਮਿਆਨੀ ਰੋਕ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਸਨ: ਐਨ-ਮਿਥਾਈਲ-ਡੀ-ਐਸਪਾਰਟੇਟ, ਕਵਿਸਕੁਲੇਟ, ਐਲ-ਗਲੂਟਾਮਿਕ ਐਸਿਡ ਡਾਈਥਾਈਲ ਐਸਟਰ, ਐਨ-ਮਿਥਾਇਲ-ਐਲ-ਐਸਪਾਰਟੇਟ, ਕਾਇਨੇਟ, ਅਤੇ 2-ਐਮੀਨੋ-4 -ਫੋਸਫੋਨੋਬਿਊਟਾਇਰੇਟ।ਬਾਈਡਿੰਗ ਨੂੰ ਚੂਹੇ ਦੇ ਦਿਮਾਗ ਦੀ ਝਿੱਲੀ ਦੁਆਰਾ ਰੋਕਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਇੱਕ ਪ੍ਰੋਟੀਨ-ਨਿਰਭਰ [3H] ਗਲੂਟਾਮੇਟ ਬਾਈਡਿੰਗ ਇੱਕ ਵਾਰ-ਵਾਰ ਜੰਮੀ-ਪਘਲੀ ਹੋਈ ਝਿੱਲੀ ਦੀ ਤਿਆਰੀ ਨਾਲ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ ਜਦੋਂ ਬਾਈਡਿੰਗ ਟ੍ਰਿਸ-ਐਸੀਟੇਟ ਬਫਰ ਵਿੱਚ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਇਹ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਕਿ ਟ੍ਰਿਸ-ਐਸੀਟੇਟ ਜਾਂ HEPES -KOH ਬਫਰ ਨੂੰ ਗਲੂਟਾਮੇਟ ਬਿਨ ਡਿੰਗ ਅਸੇ ਵਿੱਚ ਵਰਤਿਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।ਜੇਕਰ ਟ੍ਰਿਸ-ਐਚਸੀਐਲ ਜਾਂ ਟ੍ਰਿਸ-ਸਿਟਰੇਟ ਬਫਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਮਾਈਕ੍ਰੋਫਿਊਜ ਟਿਊਬਾਂ ਜਾਂ ਗਲਾਸ ਫਾਈਬਰ ਫਿਲਟਰਾਂ ਨਾਲ ਬੰਨ੍ਹਣ ਲਈ ਠੀਕ ਕਰਨ ਲਈ ਉਚਿਤ ਨਿਯੰਤਰਣ ਪ੍ਰਯੋਗ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।