ਉਤਪਾਦ

X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside ਲਈ ਵੀ ਸੰਖੇਪ ਰੂਪ ਵਿੱਚ BCIG) ਇੱਕ ਜੈਵਿਕ ਮਿਸ਼ਰਣ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਗੈਲੇਕਟੋਜ਼ ਇੱਕ ਬਦਲੇ ਹੋਏ ਇੰਡੋਲ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ।ਮਿਸ਼ਰਣ ਨੂੰ 1964 ਵਿੱਚ ਜੇਰੋਮ ਹੌਰਵਿਟਜ਼ ਅਤੇ ਸਹਿਯੋਗੀਆਂ ਦੁਆਰਾ ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਰਸਮੀ ਰਸਾਇਣਕ ਨਾਮ ਨੂੰ ਅਕਸਰ ਘੱਟ ਸਟੀਕ ਪਰ ਘੱਟ ਬੋਝਲ ਵਾਕਾਂਸ਼ਾਂ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਬ੍ਰੋਮੋਕਲੋਰੋਇੰਡੋਕਸਿਲ ਗਲੈਕਟੋਸਾਈਡ ਤੱਕ ਛੋਟਾ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਇੰਡੋਕਸਿਲ ਤੋਂ X, X-ਗੈਲ ਸੰਕੁਚਨ ਵਿੱਚ X ਦਾ ਸਰੋਤ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਐਕਸ-ਗੈਲ ਨੂੰ ਅਕਸਰ ਅਣੂ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਐਨਜ਼ਾਈਮ, β-ਗੈਲੈਕਟੋਸਾਈਡਜ਼, ਇਸਦੇ ਆਮ ਨਿਸ਼ਾਨੇ ਦੀ ਥਾਂ, ਇੱਕ β-ਗਲੈਕਟੋਸਾਈਡ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਹਿਸਟੋਕੈਮਿਸਟਰੀ ਅਤੇ ਬੈਕਟੀਰੀਓਲੋਜੀ ਵਿੱਚ ਇਸ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਵੀ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਐਕਸ-ਗੈਲ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਇੰਡੋਕਸਿਲ ਗਲਾਈਕੋਸਾਈਡਾਂ ਅਤੇ ਐਸਟਰਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ ਹੈ ਜੋ ਐਨਜ਼ਾਈਮ-ਕੈਟਾਲਾਈਜ਼ਡ ਹਾਈਡੋਲਿਸਿਸ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਇੰਡੀਗੋ ਡਾਈ ਦੇ ਸਮਾਨ ਅਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਨੀਲੇ ਮਿਸ਼ਰਣ ਪੈਦਾ ਕਰਦੇ ਹਨ।

X-gal ਲੈਕਟੋਜ਼ ਦਾ ਇੱਕ ਐਨਾਲਾਗ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਸਲਈ β-galactosidase ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੁਆਰਾ ਹਾਈਡ੍ਰੋਲਾਈਜ਼ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜੋ D-ਲੈਕਟੋਜ਼ ਵਿੱਚ β-ਗਲਾਈਕੋਸੀਡਿਕ ਬਾਂਡ ਨੂੰ ਤੋੜਦਾ ਹੈ।X-gal, ਜਦੋਂ β-galactosidase ਦੁਆਰਾ ਕੱਟਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਗੈਲੇਕਟੋਜ਼ ਅਤੇ 5-bromo- 4-chloro-3-hydroxyindole ਪੈਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ - 1. ਬਾਅਦ ਵਾਲਾ ਫਿਰ ਸਵੈਚਲਿਤ ਤੌਰ 'ਤੇ ਡਾਈਮਰਾਈਜ਼ ਹੋ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ 5,5'-ਡਿਬਰੋਮੋ-4,4'-ਡਾਈਕਲੋਰੋ ਵਿੱਚ ਆਕਸੀਕਰਨ ਹੋ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। -ਇੰਡੀਗੋ - 2, ਇੱਕ ਤੀਬਰ ਨੀਲਾ ਉਤਪਾਦ ਜੋ ਅਘੁਲਣਯੋਗ ਹੈ।X-gal ਆਪਣੇ ਆਪ ਵਿੱਚ ਰੰਗਹੀਣ ਹੈ, ਇਸਲਈ ਨੀਲੇ ਰੰਗ ਦੇ ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ β-galactosidase ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਲਈ ਇੱਕ ਟੈਸਟ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਬੈਕਟੀਰੀਆ β-galactosidase (ਅਖੌਤੀ lacZ) ਨੂੰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਰਿਪੋਰਟਰ ਵਜੋਂ ਵਰਤਣ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ।

ਦੋ-ਹਾਈਬ੍ਰਿਡ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਵਿੱਚ, β-galactosidase ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਰਿਪੋਰਟਰ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜੋ ਇੱਕ ਦੂਜੇ ਨਾਲ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਪਾਉਂਦੇ ਹਨ।ਇਸ ਵਿਧੀ ਵਿੱਚ, ਜੀਨੋਮ ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀਆਂ ਨੂੰ ਖਮੀਰ ਜਾਂ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਲਈ ਸਕ੍ਰੀਨ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਜਿੱਥੇ ਸਕ੍ਰੀਨ ਕੀਤੇ ਜਾ ਰਹੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਇੱਕ ਸਫਲ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਇਸਦਾ ਨਤੀਜਾ ਇੱਕ ਪ੍ਰਮੋਟਰ ਨਾਲ ਇੱਕ ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਡੋਮੇਨ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਦਾ ਨਤੀਜਾ ਹੋਵੇਗਾ।ਜੇਕਰ ਪ੍ਰਮੋਟਰ ਇੱਕ lacZ ਜੀਨ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ, ਤਾਂ β-galactosidase ਦਾ ਉਤਪਾਦਨ, ਜਿਸਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ X-gal ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ ਨੀਲੇ-ਪਿਗਮੈਂਟਡ ਕਲੋਨੀਆਂ ਦਾ ਗਠਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਲਈ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਇੱਕ ਸਫਲ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਤਕਨੀਕ ਲਗਭਗ 106 ਤੋਂ ਘੱਟ ਆਕਾਰ ਦੀਆਂ ਸਕਰੀਨਿੰਗ ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀਆਂ ਤੱਕ ਸੀਮਿਤ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ। ਐਕਸ-ਗੈਲ ਦਾ ਸਫਲ ਕਲੀਵੇਜ ਵੀ ਇੰਡੋਲ ਦੇ ਅਸਥਿਰਤਾ ਦੇ ਕਾਰਨ ਇੱਕ ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਬਦਬੂ ਪੈਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ।

ਜਿਵੇਂ ਕਿ X-gal ਆਪਣੇ ਆਪ ਵਿੱਚ ਰੰਗ ਰਹਿਤ ਹੈ, ਨੀਲੇ ਰੰਗ ਦੇ ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਨੂੰ ਇੱਕ ਸਰਗਰਮ β-galactosidase ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਲਈ ਇੱਕ ਟੈਸਟ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।

ਇੱਕ ਸਰਗਰਮ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਇਹ ਆਸਾਨ ਪਛਾਣ βgalactosidase (lacZ ਜੀਨ) ਲਈ ਜੀਨ ਨੂੰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਰਿਪੋਰਟਰ ਜੀਨ ਵਜੋਂ ਵਰਤਣ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦੀ ਹੈ।