ਉਤਪਾਦ

5-ਫਲੋਰੋਰਾਸਿਲ (5-FU) ਅਤੇ ਦੋ ਐਂਡੋਜੇਨਸ ਮੋਨੋਫੋਸਫੇਟ ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡਸ ਦੇ ਕਈ ਮੈਟਾਬੋਲਾਈਟਾਂ ਨੂੰ ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਾਪਣ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਤਰਲ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ-ਟੈਂਡਮ ਮਾਸ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਮੈਟਰੀ (LC-MS/MS) ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਇੱਕ ਅਸਲੀ ਵਿਧੀ ਵਿਕਸਿਤ ਕੀਤੀ ਹੈ।ਇਸ ਪਰਖ ਨੇ ਇਹ ਨਿਰਧਾਰਨ ਕਰਨ ਦੀ ਇਜਾਜ਼ਤ ਦਿੱਤੀ: (i) 5-FU ਜਾਂ 5-ਫਲੂਰੋ-2′-deoxyuridine (5-FdUrd) ਤੋਂ 5-ਫਲੋਰੋ-2′-ਡੀਓਕਸੀਯੂਰੀਡੀਨ-5′-ਮੋਨੋਫੋਸਫੇਟ (5-FdUMP) ਦਾ ਅੰਦਰੂਨੀ ਉਤਪਾਦਨ। , (ii) ਇੰਟਰਾਸੈਲੂਲਰ 2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (dUMP)/thymidine-5′-monophosphate (TMP) ਅਨੁਪਾਤ 'ਤੇ 5-FdUMP ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦਾ ਪ੍ਰਭਾਵ, ਅਤੇ (iii) 5-FdUMP ਦੀ secretion ਸੀਮਾ ਅਤੇ ਏਬੀਸੀ ਟ੍ਰਾਂਸਪੋਰਟਰਾਂ ਦੁਆਰਾ ਮਨੁੱਖੀ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਸੈੱਲਾਂ ਤੋਂ 5-ਐਫ.ਯੂ.ਸਾਡੀਆਂ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੇ ਤਹਿਤ, ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ 5-FU ਜਾਂ 5-FUrd ਨਾਲ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਫਿਰ, ਸੈਲੂਲਰ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਿਥੇਨੌਲ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ.ਇਸ ਵਿਧੀ ਨੇ ਉੱਚ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਰਿਕਵਰੀ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤੀ.ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਸੈੱਲਾਂ ਤੋਂ 5-FU ਅਤੇ 5-FdUMP secretion ਨੂੰ ਮਾਪਣ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ ਇਹਨਾਂ ਅਣੂਆਂ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਪੂਰਾ ਕੀਤਾ।ਮੀਡੀਆ ਜਾਂ ਤਾਂ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਟੀਕਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ (5-FU) ਜਾਂ ਓਏਸਿਸ ਵੈਕਸ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਕਾਰਟ੍ਰੀਜ (5-FdUMP) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਇੱਕ ਠੋਸ ਪੜਾਅ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਦੇ ਅਧੀਨ ਗਿਆ ਸੀ।ਅਮੋਨੀਅਮ ਫਾਰਮੇਟ ਬਫਰ/ਮਿਥੇਨੌਲ/ਵਾਟਰ (5/5/90, v/v) ਨੂੰ ਮੋਬਾਈਲ ਪੜਾਅ ਵਜੋਂ ਵਰਤਦੇ ਹੋਏ ਆਈਸੋਕ੍ਰੇਟਿਕ ਮੋਡ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ dC18 ਐਟਲਾਂਟਿਸ 3.5 μm, (100 mm × 2.1 mm id) ਕਾਲਮ 'ਤੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦਾ ਵਿਭਾਜਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਰਨ ਟਾਈਮ 6.2 ਮਿੰਟ ਤੋਂ ਵੱਧ ਨਹੀਂ ਸੀ।ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਕਾਂ ਨੂੰ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਆਇਨ ਮੋਡ ਦੇ ਅਧੀਨ ਇੱਕ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਸਪ੍ਰੇ ਇੰਟਰਫੇਸ ਵਿੱਚ ionized ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਅਸੀਂ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ 2.5–150 ng mL −1 ਦੀ ਰੇਂਜ ਵਿੱਚ ਵਿਧੀ ਨੂੰ ਪ੍ਰਮਾਣਿਤ ਕੀਤਾ ਹੈ।ਸੱਤ ਦਿਨਾਂ ਵਿੱਚ ਅੰਤਰ-ਅਤੇ ਅੰਤਰ-ਪਰਖ ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲਤਾ 10% ਤੋਂ ਘੱਟ ਸੀ।ਸਾਰੇ ਮਿਸ਼ਰਣ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਜਾਂ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ ਸਥਿਰ ਸਨ ਜਦੋਂ ਨਮੂਨੇ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ ਦੋ ਹਫ਼ਤਿਆਂ ਲਈ −20 °C 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ, ਅਤੇ ਤਿੰਨ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਥੌ ਚੱਕਰਾਂ ਤੋਂ ਬਾਅਦ।ਦੋਵਾਂ ਮੀਡੀਆ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨਹੀਂ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ।