ਉਤਪਾਦ

ਕਾਪੋਸੀ ਦੇ ਸਾਰਕੋਮਾ-ਐਸੋਸੀਏਟਿਡ ਹਰਪੀਸਵਾਇਰਸ (KSHV) ਦਾ ORF45 ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਇੱਕ ਗਾਮਾਹੇਰਪੀਸਵਾਇਰਸ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਤਤਕਾਲ-ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਟੇਗੂਮੈਂਟ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਹੈ।ਸਾਡੇ ਪਿਛਲੇ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ KSHV ਦੀ ਲਾਗ ਦੇ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਅਤੇ ਅਖੀਰਲੇ ਪੜਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਇਸਦੀਆਂ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭੂਮਿਕਾਵਾਂ ਦਾ ਖੁਲਾਸਾ ਕੀਤਾ ਹੈ।ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਮੋਨੋਕਲੋਨਲ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਦੇ ਇੱਕ ਪੈਨਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ORF45 ਦੇ ਇੰਟਰਐਕਟੋਮ ਦਾ ਸਰਵੇਖਣ ਕੀਤਾ।ਪਹਿਲਾਂ ਪਛਾਣੇ ਗਏ ਐਕਸਟਰਸੈਲੂਲਰ ਰੈਗੂਲੇਟਿਡ ਕਿਨੇਜ਼ (ERK) ਅਤੇ p90 ਰਾਇਬੋਸੋਮਲ S6 kinase (RSK) ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਸਾਨੂੰ ∼38 kDa ਅਤੇ ∼ 130 kDa ਦੇ ਪ੍ਰਮੁੱਖ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਮੇਤ ਕਈ ਹੋਰ ਕੋਪਰੀਫਾਈਡ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਿਲੇ ਹਨ।ਮਾਸ ਸਪੈਕਟਰੋਮੈਟਰੀ ਨੇ ਖੁਲਾਸਾ ਕੀਤਾ ਕਿ 38-kDa ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਵਾਇਰਲ ORF33 ਹੈ ਅਤੇ 130-kDa ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸੈਲੂਲਰ USP7 (ਯੂਬੀਕਿਟਿਨ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਪ੍ਰੋਟੀਜ਼ 7) ਹੈ।ਅਸੀਂ ORF33-ਬਾਈਡਿੰਗ ਡੋਮੇਨ ਨੂੰ ORF45 ਦੇ ਉੱਚ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਕਾਰਬਾਕਸਾਇਲ-ਟਰਮੀਨਲ 19 ਐਮੀਨੋ ਐਸਿਡ (AA) ਅਤੇ USP7-ਬਾਈਡਿੰਗ ਡੋਮੇਨ ਨੂੰ ORF45 ਦੇ ਕੇਂਦਰੀ ਖੇਤਰ ਵਿੱਚ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਸਹਿਮਤੀ ਮੋਟਿਫ ਨਾਲ ਮੈਪ ਕੀਤਾ ਹੈ।ਇਮਯੂਨੋਫਲੋਰੇਸੈਂਸ ਸਟੈਨਿੰਗ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਅਸੀਂ ORF33 ਜਾਂ USP7 ਦੇ ਨਾਲ ORF45 ਦੇ ਸਮੂਹਿਕਕਰਨ ਨੂੰ ਟ੍ਰਾਂਸਫੈਕਟਡ ਕੰਡੀਟ ਆਇਨਾਂ ਅਤੇ KSHV- ਸੰਕਰਮਿਤ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਦੇਖਿਆ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਅਸੀਂ ਨਿਊਕਲੀਅਸ ਤੋਂ ਸਾਇਟੋਪਲਾਜ਼ਮ ਤੱਕ ORF33/USP7 ਦੇ ਇੱਕ ਹਿੱਸੇ ਦਾ ORF45-ਨਿਰਭਰ ਪੁਨਰ-ਸਥਾਨਕੀਕਰਨ ਦੇਖਿਆ ਹੈ।ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ ORF45 ਨੇ ORF33 ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਇਕੱਠਾ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਵਾਧਾ ਕੀਤਾ ਹੈ ਜੋ ਕਿ ORF33- ਜਾਂ ORF45 ਵਿੱਚ USP7-ਬਾਈਡਿੰਗ ਡੋਮੇਨ ਨੂੰ ਮਿਟਾਉਣ 'ਤੇ ਖਤਮ ਕਰ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, KSHV ਜੀਨੋਮ ਵਿੱਚ ORF45 ਦੇ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਕਾਰਬੌਕਸਿਲ ਟਰਮਿਨਸ ਨੂੰ ਮਿਟਾਉਣ ਨਾਲ KSHV- ਸੰਕਰਮਿਤ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ORF33 ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਪੱਧਰ ਨੂੰ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ ਅਤੇ ਪ੍ਰਜਨਨ ਵਾਇਰਸ ਦੇ ਉਤਪਾਦਨ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕਰ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।ਸਮੂਹਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਸਾਡੇ ਨਤੀਜੇ ਨਾ ਸਿਰਫ਼ ORF45 ਇੰਟਰਐਕਟੋਮ ਦੇ ਨਵੇਂ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਗਟ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਸਗੋਂ ਇਹ ਵੀ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ KSHV ਲਾਈਟਿਕ ਰੀਪਲੀਕੇਸ਼ਨ ਲਈ ਇਹਨਾਂ ਪ੍ਰੋਟੀਨਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹਨ। ਕਾਪੋਸੀ ਦਾ ਸਾਰਕੋਮਾ-ਸਬੰਧਤ ਹਰਪੀਸਵਾਇਰਸ (KSHV) ਕਈ ਮਨੁੱਖੀ ਕੈਂਸਰਾਂ ਦਾ ਕਾਰਕ ਹੈ।KSHV ORF45 ਇੱਕ ਮਲਟੀਫੰਕਸ਼ਨਲ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਹੈ ਜੋ KSHV ਲਾਈਟਿਕ ਰੀਪਲੀਕੇਸ਼ਨ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਸਹੀ ਵਿਧੀ ਜਿਸ ਦੁਆਰਾ ORF45 ਆਪਣੇ ਨਾਜ਼ੁਕ ਕਾਰਜ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਸਪਸ਼ਟ ਹੈ।ਸਾਡੇ ਪਿਛਲੇ ਅਧਿਐਨਾਂ ਤੋਂ ਪਤਾ ਲੱਗਾ ਹੈ ਕਿ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਸਾਰੇ ORF45 pr otein ਉੱਚ-ਅਣੂ-ਵਜ਼ਨ ਵਾਲੇ ਕੰਪਲੈਕਸਾਂ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਹਨ।ਇਸ ਲਈ ਅਸੀਂ ਲੀਟਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਇਸਦੀਆਂ ਭੂਮਿਕਾਵਾਂ ਬਾਰੇ ਸੂਝ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਨ ਲਈ ORF45 ਦੇ ਇੰਟਰਐਕਟੋਮ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਣ ਦੀ ਕੋਸ਼ਿਸ਼ ਕੀਤੀ।ਮੋਨੋਕਲੋਨਲ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਦੇ ਇੱਕ ਪੈਨਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਅਸੀਂ KSHV- ਸੰਕਰਮਿਤ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ORF45 ਇੰਟਰਐਕਟੋਮ ਦਾ ਸਰਵੇਖਣ ਕੀਤਾ।ਅਸੀਂ ORF45 ਦੇ ਦੋ ਨਵੇਂ ਬਾਈਡਿੰਗ ਭਾਈਵਾਲਾਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕੀਤੀ: ਵਾਇਰਲ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ORF33 ਅਤੇ ਸੈਲੂਲਰ ਯੂਬੀਕਿਟਿਨ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਪ੍ਰੋਟੀਜ਼ 7 (USP7)।ਅਸੀਂ ਅੱਗੇ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ORF45 ਅਤੇ ORF33 ਵਿਚਕਾਰ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ KSHV ਵਾਇਰਲ ਕਣਾਂ ਦੇ ਕੁਸ਼ਲ ਉਤਪਾਦਨ ਲਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ, ਇਹ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਇਸ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨਾਲ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਦਖਲਅੰਦਾਜ਼ੀ KSHV ਲਾਈਟਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਇੱਕ ਨਵੀਂ ਰਣਨੀਤੀ ਨੂੰ ਦਰਸਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।